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    Biologie
    publié le 11/06/2012

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    Le rôle du récepteur CCR10 dans la progression tumorale

    Document de 27 pages au format PDF

    RÉSUMÉ

    Mémoire de Master 2 Recherche sur le rôle des chimiokines et leurs récepteurs dans la progression tumorale et le développement des métastases à travers l'étude du récepteur CCR10 dans les tumeurs colorectales et prostatiques.

    EXTRAIT

    L'inflammation est un processus capital dans le maintien et la réparation des tissus. La réponse inflammatoire comporte trois phases distinctes : l'induction, l'amplification, et enfin la réparation du ou des tissus lésés.
    Toutes ces phases passent par un afflux de leucocytes d'origine vasculaire sur le lieu de l'inflammation provoquant la libération de radicaux libres et d'enzymes aptes à restaurer un équilibre tissulaire.
    L'inflammation est hautement contrôlée et coordonnée par un réseau d'information moléculaire faisant intervenir plusieurs classes de protéines dont les cytokines. Celles-ci sont responsables de la coordination inter-cellulaire à tous les niveaux de la réponse inflammatoire : présentation antigénique aux lymphocytes, afflux des leucocytes sur le lieu de l'inflammation, activation et diapédèse de ces mêmes cellules, contrôle de l'infiltrat leucocytaire et de son amplification dans le tissu, contrôle de la balance pro et antiinflammatoire
    essentielle pour la réparation tissulaire...
    Cependant, ce phénomène extrêmement régulé peut parfois échapper à cette régulation et participer au développement de situations pathologiques, telles que certaines maladies chroniques (lupus, polyarthrite rhumatoïde...).
    Parmi ces maladies chroniques liées à l'inflammation est venu s'ajouter récemment la pathologie néoplasique, pour laquelle une augmentation chronique de l'inflammation va jouer un rôle dans son initiation, sa croissance, et pour finir sa généralisation par l'intermédiaire du phénomène métastatique libérant des cellules tumorales après remodelage tissulaire et vasculaire (néoangiogenèse).

    [...] Les études immunohistochimiques utilisant un anticorps anti-CCR10 dirigé contre le tissu humain sont quasi-inexistantes. La mise au point de l'anticorps a donc été faite à partir de tissu testiculaire, dans lequel est observé une forte expression de l'ARNm de CCR10, afin d'établir un contrôle positif. Le contrôle négatif est réalisé sur le même tissu en remplaçant l'anticorps par un sérum pré-immun de l'animal synthétisant cet anticorps. Le premier anticorps (anticorps de lapin) testé n'était pas spécifique de la protéine CCR10. Le deuxième anticorps (anticorps de chèvre) testé est dirigé contre l'extrémité amino-terminale extracellulaire de CCR10. Il présente une bonne spécificité : le marquage observé est membranaire, et il n'y a pas de bruit de fond. Sur le contrôle négatif, aucun marquage n'est observé (...)

    PLAN

    Liste des figures et des tableaux
    Liste des abréviations et des sigles

    Introduction générale : inflammation et cancer

    1. Introduction de la problématique : cytokines et cancer

    1.1. La superfamille des chimiokines
    1.1.1. Classification structurale des chimiokines
    1.1.2. Classification fonctionnelle

    1.2. Les récepteurs aux chimiokines
    1.2.1. Classification structurale des RCPG
    1.2.2. Signalisation induite par la liaison chimiokine-récepteur

    1.3. Rôle des chimiokines dans le cancer

    1.4. Couple CCR10/CCL27 ou 28
    1.4.1. CCR10 et inflammation de la peau
    1.4.2. CCR10 et mélanome malin

    1.5. Intérêt de CCR10 et but du stage

    2. Matériels et méthodes

    2.1. Lignées cellulaires
    2.2. Tissus
    2.3. Fabrication du bloc en paraffine de TMA (Tissue Micro-Array)
    2.4. Immunohistochimie indirecte à la péroxydase
    2.5. Extraction de l'ARN total
    2.6. RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)
    2.7. Choix des amorces
    2.8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
    2.9. Séquençage
    2.10. Clonages
    2.11. Purification des plasmides/ Minipréparation
    2.12. PCR Quantitative en temps réel (QPCR)

    3. Résultats

    3.1. Etude de l'expression des ARNM dans le cancer du colon
    3.1.1. Mise en place de la gamme d'étalonnage
    3.2.2. QPCR de patients atteints d'un cancer du colon

    3.2. Etude de l'expression de la protéine CCR10 dans différentes tumeurs
    3.2.1. Mise au point de l'anticorps
    3.2.2. Immunohistochimie des blocs de TMA

    3.3. Clonage et tranfection du gène entier CCR10 dans les cellules de mammifères LMTK

    4. Discussion

    Conclusion et perspectives
    Bibliographie

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