Étude du mécanisme utilisé par une protéine structurale pour courber l'ADN : caractérisation par mutagenèse dirigée

Biologie | 26 pages | 11-01-2008 | Format : | Note : Non noté |

PRIX : 5.40€ |

Résumé

Mémoire de stage effectué au sein du CNRS d'Orléans (biophysique moléculaire) portant sur l'Étude du mécanisme utilisé par une protéine structurale pour courber l'ADN : caractérisation par mutagenèse dirigée.

Extrait:

La protéine MC1 (Methanogen Chromosomal protein 1) est une protéine de type histone majeure chez différentes espèces de Methanosarcinaceae, une famille d'archaeabactéries méthanogéniques.

Son association avec l'ADN a été mise en évidence in vivo et son rôle physiologique est probablement de participer à la structuration du chromosome. MC1 est une protéine de 93 acides aminés (11kDa), essentiellement basique avec une charge nette de +12 à pH neutre (elle comporte 24 acides aminés basiques et 12 acides). Elle est capable de compacter et de fortement courber l'ADN (...)

Sommaire:

Sigles et abréviations
Tables des figures
Présentation du CNRS

Etude bibliographique

I) Étude de la protéine MC1
II) Obtention d'une protéine mutante

Matériel et méthodes

I) Obtention de protéines mutantes

A. Mutagénèse
1. Pureté des oligonucléotides
2. PCR
B. Transformation de bactéries et purification de plasmides

C. Production de protéines mutantes
D. Purification de protéines
E. Récapitulatif des activités réalisées

II) Étude de la fixation du "Double Mutant" sur l'ADN

A. Préparation d'ADN radiomarqué de 26pb (spécifique)
B. Préparation d'ADN radiomarqué de 16pb (non spécifique)

III) Résultats et discussion

A. Mutagénèse
B. Séquençage
C. Production de la protéine mutante
D. Purification de la protéine
E. Analyse de l'interaction entre l'ADN et la protéine native/mutante

Conclusion et perspectives

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